LacZ er et bakterielt gen, der producerer enzymet beta-galactosidase , som nedbryder laktose til glukose og galactose . Enzymet spalter også forbindelsen X-gal , som frembringer en blå farve, som molekylærbiologer bruge som en markør eller reporter til at spore tilstedeværelsen af ​​LacZ- genet i celler . Transfektionseffektiviteter

Forskere forbinder LacZ -genet med et gen af ​​interesse , såsom insulin , med et fragment af DNA kaldes et plasmid . De bruger kemiske eller elektriske transfektionsfremgangsmåder at få plasmidet i cellerne . Cellerne analyseres for LacZ ekspression af beta -galactosidase , hvilket også vil markere tilstedeværelsen af ​​insulin genet.
Fiksering

Efter transfektion , cellerne dyrkes på en plastik petriskål . For assay vækstmediet fjernet, og cellerne vaskes med phosphatpufret saltvand ( PBS ) . En frisk fiksering opløsning af formaldehyd , methanol og glutaraldehyd anvendes til fikseres cellerne i to minutter . Fiksativet fjernes, og cellerne vaskes igen med PBS.
X-gal

En frisk farvning opløsning, der indeholder X-gal , kalium ferro - cyanid og kalium ferro- cyanid tilsættes til cellerne natten over . Cellerne vaskes igen med PBS , og hvis LacZ genet er til stede, vil beta -galactosidase have spaltes X- gal , og cellerne vil være blå .