Forskere rutinemæssigt overvåger cellevækst. Det kan være en del af ordinær celle vedligeholdelse , eller som del af et eksperiment . For eksempel kan et eksperiment sættes op til at sammenligne virkningerne af tre forskellige stoffer på væksten af celler . I dette tilfælde er fire kolber med celler i den samme koncentration sat op én uden narkotika som en kontrol , og en for hver af de tre lægemidler . Celler fjernes fra kolberne med jævne mellemrum , såsom daglig , optalt og registreret. De celleantal plottes på en graf over tid , virkningerne af lægemidler på cellevækst kan sammenlignes med kontrollen. Ting du skal
celler i suspension
reagensglas
pipetter
Vækstmedie
hæmacytometer
Cover slip
Hand taelleinstrument
Lens papir
trypanblåt
mikroskop
Vis Flere Instruktioner
Cells
1

Swirl celler forsigtigt for at få en endnu suspension. Fjern en mængde af celler, såsom 1,0 milliliter ( ml ) , med en pipette og overføres til et reagensglas . Fortynd celler til at give 100.000 til 500.000 celler pr ml - det bør give omkring 100 celler , der er nødvendige for statistisk signifikans ved optælling
2

Fortynd celler, hvis det er nødvendigt , ved at tilføje 9,0 ml medium til . 1,0 ml celler . Bland og optage fortynding. Hvis cellerne stadig er for koncentreret , fjerne 1,0 ml fortyndet celler til et frisk rør , tilsæt 9,0 ml medium , blandes og optage fortynding. Pattedyrceller vokser sædvanligvis i intervallet 100.000 til 5.000.000 pr ml , så bør 0 til 2 fortyndinger være tilstrækkelig.
3

Bland cellerne fra den endelige fortynding . Fjern en lille volumen, såsom 0,1 ml , og plads i et nyt rør . Tilføj en tilsvarende mængde trypanblåt , mix og optage fortynding. Døde celler tage op trypanblå og vises blåt under mikroskop.
Counting
4

Polér hæmacytometer og dækglasset med linse papir og sted dækglas på hemocytameter nettet. Tilføj en dråbe fortyndet celler til V-form ved siden af ​​nettet . Celler bevæger sig under dækglasset ved kapillarvirkning .
5.

Placer glider på mikroskopet , fokus på nettet og bruge hånd taelleinstrument at tælle de levedygtige , ikke blå, celler. Cellerne bør ikke overlappe , hvis for tæt, udfører en ny fortynding. Hvis cellerne er for fortynde, udarbejde en mere koncentreret prøve.
6

Fjern hemacytometer , ren, genindlæse, og tælle igen. Tæl hver celle prøve tre gange.
Beregning
7

Beregn antallet af celler pr ml. Den hemacytometer grid er opdelt i 9 store kvadrater , hver med et volumen på 0,1 ml.
8

Divider antallet af celler tælles med antallet af store anvendte kvadrater ( ni , hvis du bruger hele nettet ) , og ganges med 10.000 for at få celler pr ml. Ganges med fortyndingsfaktoren (r) for den endelige koncentration .
9

Record dato , prøve , celletal , fortynding faktorer og den endelige celle nummer per ml. Forbered en graf for celletal plottet mod tid til at vise cellevækst.