fluoresceinisothiocyanat , der almindeligvis omtales som FITC - udtales " fit -c " til rim med " ditsy " - er en fluorescerende markør , som er kemisk bundet eller konjugeret til andre molekyler, såsom proteiner og antistoffer . Et antistof konjugeret med FITC kunne også blive omtalt som en " FITC - mærket antistof . " FITC er ophidset af lys ved en bølgelængde på 488 nm , og giver fluorescensenergi opdaget ved 530 nm. En videnskabsmand kan se det med et fluorescerende mikroskop eller brug udstyr, der registrerer de fluorescerende emissioner og optegnelser dem. Metoder

FITC konjugation følger en grundlæggende protokol . For eksempel ville FITC og et antistof blandes sammen på en bestemt forhold i et reagensglas og roteret ved stuetemperatur i en time . At fjerne ubundet FITC fra opløsningen , hældes den på en affinitetskromatografisøjle - et glasrør fyldt med en perle- lignende gel, der vil binde det ukonjugerede FITC . I mellemtiden vil FITC - mærkede antistof strømme gennem søjlen og opsamles til brug.
Overvejelser

Før du starter en konjugering , bør forskeren overveje flere punkter. Først , FITC er meget ustabilt og bør ikke udsættes for lys - det bør holdes i folie -dækket rør på alle tidspunkter. For det andet kan konjugation tid og temperatur skal ændres til en temperaturfølsom protein. Endelig kan forskellige proteiner og antistoffer har forskellige FITC -bindende kapacitet , så at finde det rette forhold mellem antistof til FITC er kritisk , for lidt FITC gør et antistof målbart og for meget kan ændre dens specificitet. Af denne grund bør foreløbige små bøjninger ved forskellige forhold mellem FITC til antistof sættes op parallelt. Når det optimale forhold er etableret, kan den storstilede konjugation udføres.
Bruger

Læger og forskere bruger FITC -mærkede antistoffer, hormoner og vækst faktorer i en bred vifte af assays og applikationer. For eksempel har en stamcelle som findes i blodet et molekyle på dens overflade kaldet CD34 . En laborant kan blande en patients blod med en FITC -mærket antistof specifikt for CD34 , og køre celler gennem et flowcytometer , der bruger en laserstråle til at gøre FITC fluorescerer . Dernæst cytometret adskiller de fluorescerende CD34 -celler fra resten af ​​de blodlegemer , og lægerne kan bruge disse isolerede stamceller til terapeutiske behandlinger.